本发明涉及一种RNA病毒保存液及其制备方法和应用。本发明通过复配二糖、原位凝胶剂和碳链长度为3‑22的直链或有支链的脂肪醇来制备冻存液，用于在对RNA病毒进行冻干保存之前或投入使用之前的非超低温保存，可以在较长时间内保持RNA病毒的滴度。本发明通过实验验证，以本发明的RNA病毒保存液保存的犬瘟抗原在4℃条件下保存28天滴度下降不超过1log，显著提升了RNA病毒在‑40℃～4℃液体的条件下的保存状态，可大幅度提高多联多价疫苗生产方面的灵活性。