本发明公开了一种非洲猪瘟病毒MGFs和CD2v ELISA抗体检测试剂盒。该试剂盒包括酶联反应板和酶标二抗，其中所述酶标板包被有非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物。该抗原表位多肽组合物为为序列表中序列1所示的多肽、以及序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽中的一种或两种以上的任意组合。本试剂盒使用化学合成抗原肽包被酶标板，抗原用量少、灵敏性和特异性高，可以高效地检测是否存在感染非洲猪瘟病毒野毒产生的MGF360‑505R和CD2v抗体，从而实现鉴别诊断。本发明试剂盒敏感性高、特异性好、且操作便捷，具有良好的市场前景。