本发明公开了一种非洲猪瘟病毒抗原表位多肽及其应用。非洲猪瘟病毒抗原表位多肽，为序列表中序列2所示的多肽或序列3所示的多肽。该抗原表位多肽组合物为序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽组成的组合物。本发明的抗原表位多肽或其组合物使用化学合成抗原肽包被酶标板制备成检测试剂盒，抗原用量少、灵敏性和特异性高，可以高效地检测是否存在感染非洲猪瘟病毒抗体；试剂盒具有敏感性高、特异性好、且操作便捷，具有良好的市场前景。