本发明提供一种猪塞尼卡谷病毒高效价阳性血清及其制备方法。所述方法包括：通过猪塞尼卡谷病毒抗原液和灭活苗协同作用刺激实验动物（如豚鼠）产生的免疫反应获得高中和效价的阳性血清，所制得的塞尼卡谷特异性阳性血清效价高达1:1024以上，可用于塞尼卡谷病毒疫苗的特异性检验、鉴别检验和外源病毒检验以及诊断检测等用途，为猪塞尼卡谷病毒高效价阳性血清的制备提供新思路。