本发明的一种预防林麝肺炎的三联灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：步骤1，从发病林麝体内分离获得致病性大肠杆菌、假铜绿单胞菌、肺炎克雷伯菌，上述菌种采用冷冻干燥的方法保存；步骤2，将三种细菌分别置于培养基37℃培养后，扩大培养，对菌液用浓度为4‰的甲醛进行灭活24h；步骤3，将各菌种用灭菌生理盐水稀释到8.0×109cfu/mL；步骤4，将致病性大肠杆菌、假铜绿单胞菌、肺炎克雷伯菌按照2：2：1比例混合，加入各1万单位的青链霉素，通过搅拌装置混匀得到三联灭活疫苗。该方法制备的疫苗价格低廉，易于操作，免疫效果良好。