提高重组大肠杆菌中2’-岩藻糖基乳糖产量的方法

授权公布号：CN112322565B

有效

申请

2020-11-09

申请公布

2021-02-05

授权

2023-11-10

预估到期

2040-11-09

申请号	CN202011240682.5
申请日	2020-11-09
申请公布号	CN112322565A
申请公布日	2021-02-05
授权公布号	CN112322565B
授权公告日	2023-11-10
分类号	C12N1/21;C12N15/70;C12N15/62;C12P19/00;C12R1/19N
分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
申请人名称	光明乳业股份有限公司
申请人地址	上海市闵行区吴中路578号

专利法律状态

2023-11-10 授权

状态信息

授权

2023-10-24 著录事项变更

状态信息

著录事项变更；IPC(主分类):C12N1/21；变更事项:申请人；变更前:江南大学；变更后:光明乳业股份有限公司；变更事项:地址；变更前:214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号；变更后:201103 上海市闵行区吴中路578号；变更事项:申请人；变更前:光明乳业股份有限公司；变更后:江南大学

2021-02-26 实质审查的生效

状态信息

实质审查的生效；IPC(主分类):C12N1/21；申请日:20201109

2021-02-05 公布

状态信息

公布

摘要

本发明公开了一种提高重组大肠杆菌中2’‑岩藻糖基乳糖产量的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用柔性Linker将四种不同蛋白标签分别融合在α‑1,2‑岩藻糖基转移酶FutC的N端，构建的融合蛋白FP‑futC可以不同程度地提高α‑1,2‑岩藻糖基转移酶催化合成2'‑FL的产量。其中，采用TrxA‑futC融合蛋白合成2'‑FL的产量最高，达到2.94g/L，底物乳糖的消耗达到3.55g/L，乳糖转化率为0.58mol/mol。而在对照组中，不加蛋白标签构建的质粒pMA09‑futC获得的重组大肠杆菌合成2'‑FL的产量仅为1.71g/L，乳糖消耗量为2.88g/L，乳糖转化率仅为0.42mol/mol。进一步将TrxA‑futC融合蛋白基因整合至大肠杆菌MG1655基因组上的yjiP位点，获得一株无质粒的2'‑FL基因工程菌株MG‑26△yjiP::trxA‑futC，摇瓶发酵后2'‑FL的产量达到3.85g/L，乳糖转化率为0.68mol/mol。