本发明涉及一种母乳水溶性维生素的评估方法和应用，按下述步骤进行：（1）采集母乳样品，在采集母乳样品的同时收集该母乳样品对应的母乳信息，所述母乳信息包括母亲基本信息、婴儿基本信息、膳食摄入信息和婴儿喂养信息；（2）母乳样品预处理，得到待测样品；（3）测定待测样品中的水溶性维生素含量，并与母乳信息结合，建立母乳中水溶性维生素的模型；（4）根据模型评估计算母乳中对应水溶性维生素的含量水平。本发明所述的方法可以有效的建立动态回归模型，根据母亲的膳食情况即可有效的判断母乳中水溶性维生素的含量水平，以便推断母乳水溶性维生素是否满足婴儿生长需要，同时反馈给乳母水溶性维生素中缺乏或过量的种类。