本发明涉及一种乳源外泌体的提取方法，依次按下述步骤进行：（1）将乳原料分装，离心，取清液；（2）将步骤（1）得到的清液离心，取中间层清液；（3）将步骤（2）得到的中间层清液离心，取清液，与PBS缓冲液和外泌体提取试剂混匀，孵育；（4）将步骤（3）的产物离心，保留沉淀，用PBS缓冲液重悬；（5）将步骤（4）的产物离心，取上清，即得。采用本发明提供的乳源外泌体提取方法制备的乳源外泌体，相较于其他方法制备的乳源外泌体而言，形态更完整，需要的样品体积更少，且在分离后包含的乳源外泌体的蛋白种类更多，更有利于分析研究作业。