本实用新型公开了一种乳酸菌发酵培养皿，包括底座、皿体和皿盖，皿体固定在底座上，皿盖盖紧皿体密封，皿体包括外皿体、中间皿体和内皿体，外皿体和中间皿体的侧面间形成环形的盖压通道，盖压通道底部设置有一圈弹性密封垫，中间皿体和内皿体的侧面间形成环形的密封通道，密封通道内灌水，皿盖上设置有内环形密封盖板和外环形密封盖板，外环形密封盖板穿入盖压通道挤压弹性密封垫形成密封，内环形密封盖板穿入密封通道浸入水中形成水密封。该乳酸菌发酵培养皿通过双重密封，保证培养皿内的无氧环境，防止空气中的杂菌污染的同时提高了乳酸菌发酵速度，同时皿盖打开关闭方便，极为便利。