本发明公开了一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法。该方法首先提取样品中的叶黄素酯和玉米黄质酯，然后利用酶解将叶黄素酯和玉米黄质酯转换为叶黄素和玉米黄质，最后利用高效液相色谱测定叶黄素和玉米黄质的含量并折算成叶黄素酯和玉米黄质酯。本发明采用酶解法和液相色谱技术相结合能够准确测定叶黄素酯和玉米黄质酯的含量，该方法广泛适用于软糖、片剂、胶囊剂等产品。