本发明属于化妆品技术领域，公开了一种无防腐剂的湿巾及其制备方法和应用。该无防腐剂的湿巾包括基布和浸液，基布包括季铵盐壳聚糖改性纤维，浸液包括覆盆子酮。本发明无防腐剂的湿巾将季铵盐壳聚糖改性纤维与覆盆子酮复配，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色假丝酵母菌和黑曲霉菌有明显抑制效果，在不使用防腐剂的情况下能达到良好的广谱抑菌效果，且配方简单、成本低，成分天然安全，温和不刺激，符合消费者需求，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。