本发明涉及一种提高欧夏至草愈伤组织中连翘酯苷含量的方法，其特征在于采用以下步骤：A、将欧夏至草种子预处理后接种于MS基础培养基，培养完成得无菌幼苗；B、将无菌幼苗上的胚轴接种到愈伤组织诱导培养基上，黑暗培养5天、光照培养14天后得到愈伤组织；C、将愈伤组织转入继代培养基中，25℃下进行培养，每14天继代一次，继代培养2次，得稳定的欧夏至草愈伤组织；D、将稳定的欧夏至草愈伤组织移植到液体培养基中悬浮振荡培养，悬浮振荡培养结束得富含连翘酯苷的欧夏至草愈伤组织。本发明方法具有提高欧夏至草愈伤组织中连翘酯苷的含量有益效果。