本发明公开了一种复合酶水解法从蛋壳膜中制备生物活性物质的方法，属于生物工程技术领域，其主要包括以下步骤：蛋壳膜制备、预水解、多酶水解和生物活性物质的制备，其中复合酶包括质量比为1:4～5:1的胰蛋白酶和中性蛋白酶；该制备方法并避免使用离子液体、有机溶剂等有毒试剂，且复合酶的使用让蛋壳膜水解更彻底，从而制备的物质含有丰富的蛋白质、透明质酸、硫酸软骨素等活性物质。