本发明提供一种酵母来源外泌体及其制备方法和应用，所述制备方法包括如下步骤：（1）将酵母培养至对数期时，进行仿真环境亚刺激处理，同时加入氨基酸，之后继续培养至稳定期，得到发酵液；（2）将所述发酵液进行固液分离得到细胞外泌体；将所述细胞外泌体与糖类混合，得到所述酵母来源外泌体。本发明采用仿真环境亚刺激对酵母细胞进行刺激，酵母细胞产生应激反应，分泌的高活性外泌体具备良好的抗炎症和抗氧化功效。