本发明公开了一种牛奶致敏原的比色检测试剂盒及检测方法。一种牛奶致敏原的比色检测试剂盒，包括：能够特异性识别牛奶酪蛋白的第一抗体、能够特异性识别牛奶酪蛋白且与第一抗体结合位点不同的第二抗体、牛奶酪蛋白、纳米金溶液、AgNO3溶液、对苯二酚溶液和TMB溶液即3,3',5,5'‑四甲基联苯胺溶液。该方法具有高特异性、高灵敏度、成本低廉、易于保存等优点，其制成的牛奶致敏原检测试剂盒，可用于定量检测牛奶致敏原酪蛋白。