本发明公开了一种食用菌液化菌种的制备方法，包括一级菌种的纯化培养、无菌水的制作、二级菌种的制备和液化三个步骤。首先将一级菌种在PDA加富培养基中培养，得到纯化后的一级菌种，然后将纯化后的一级菌种切分后接入溶水性培养基中，得到二级菌种，最后将二级菌种用菌种高速粉碎机打碎菌丝，再加入到无菌水中进行稀释得到液化菌种。该制备方法，工艺简单，接种简便，发菌快，出菇早，优质高产，效率高，污染风险小，投资和运行成本低，经济效益好。使用该方法制备的食用菌液化菌种接种后，菌种的渗透力强，发菌快。而且，食用菌液化菌种的栽培出菇时间大大缩短、出菇整齐、生长速度快，产量明显提高。