本发明属于湿纸巾防腐效果评价技术领域，涉及一种湿纸巾防腐效果的评价方法。本发明评价方法包括：S1布片染菌：将各种细菌菌液、真菌悬液等比例混合，得混合菌液；将10片湿纸巾分为细菌试样5片，真菌试样5片，试样平展后，滴染混合菌液，放入无菌瓶，分别标记为细菌0d、细菌7d、细菌14d、细菌21d、细菌28d，真菌0d、真菌7d、真菌14d、真菌21d、真菌28d；分别于0d、7d、14d、21d、28d加入洗脱液洗下试样上的微生物，吸取样液或稀释液，置于灭菌平皿内，用培养基作倾注，琼脂凝固后翻转平皿，培养后，进行活菌菌落计数；S2结果计算；S3评价方法。本发明评价方法简单易操作，适用于大批量的筛选。