本发明属于食品深加工技术领域，具体涉及一种提取自核桃粕的酪氨酸酶抑制肽及其制备方法与应用。所述酪氨酸酶抑制多肽FPY的氨基酸序列为Phe‑Pro‑Tyr，C端为Tyr，N端为Phe。本发明提供的FPY对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶均有抑制作用，其IC50分别为0.47±0.01mg/mL、1.37±0.03mg/mL；本发明提供的FPY在主要胃肠蛋白酶消化后，其对酪氨酸单酚酶及二酚酶的IC50值与消化前相比无明显差异；RP‑HPLC鉴定结果显示，FPY消化前后的保留时间、峰面积和峰高并无明显变化，表明酪氨酸酶抑制肽FPY具有良好的体外消化稳定性。