本发明提供一种重组杆状病毒及其在制备新城疫病毒样颗粒中的应用，所提供的重组杆状病毒，其中包含有编码新城疫病毒HN、F蛋白的核苷酸片段；所述的HN和F蛋白，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:8。本发明所构建的重组杆状病毒用于在昆虫细胞中制备新城疫病毒的病毒样颗粒；本发明所制备的病毒样颗粒用于制备疫苗。本发明通过对新城疫病毒HN、F蛋白的cDNA全序列进行筛选和分析，选取了其中抗原表位较丰富、能够在昆虫细胞中高效表达的cDNA序列。再对HN和F蛋白进行优化改造后，利用昆虫细胞‑杆状病毒表达系统制备病毒样颗粒，病毒蛋白产量显著高于SPF胚培养的病毒，生产成本明显降低。