本发明涉及一种预防牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎、牛副流感的三联灭活疫苗及其制备方法。本发明所述疫苗其有效成分包括牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒与牛副流感3型病毒的灭活抗原,该三联灭活疫苗是利用细胞转瓶、全悬浮及微载体培养的传代细胞系进行病毒增殖，并对制苗工艺等进行了优化。疫苗安全和效力检验结果显示：使用本发明的三联灭活疫苗免疫牛后没有任何局部和全身不良反应，所有的牛都产生了免疫保护，说明本发明的疫苗安全可靠，可达到“一针三防”的目的，降低经济损失。