本发明涉及一种预防牛轮状病毒、牛冠状病毒的二联灭活疫苗及其制备方法。本发明所述疫苗其有效成分包括牛轮状病毒和牛冠状病毒的灭活抗原，该二联灭活疫苗的抗原成分可经传代细胞系（针对牛轮状病毒与牛冠状病毒）或微载体悬浮培养（针对牛轮状病毒）进行病毒增殖，并对制苗工艺等进行了优化。疫苗安全、效力试验与抗体跟踪结果显示：使用本发明的二联灭活疫苗免疫牛后无不良反应，免疫怀孕牛后不导致流产。免疫牛都产生了免疫保护，新生犊牛可通过母乳获得高水平母源抗体。结果说明本发明的疫苗安全可靠，可用于预防犊牛腹泻的发生。