本发明涉及一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗及其制备方法。本发明所述疫苗其有效成分包括兔病毒性出血症病毒VP60蛋白抗原、灭活的多杀性巴氏杆菌QLT‑1株和支气管败血波氏杆菌JN01株抗原，该三联灭活疫苗免疫后保护性抗体产生快，免疫攻毒保护率高，对兔病毒性出血症病毒AV‑34株、多杀性巴氏杆菌QLT‑1株、支气管败血波氏杆菌JN01株的攻毒保护率均达到80％以上。结果说明本发明的疫苗安全可靠，可用于预防兔病毒性出血症（兔瘟）、兔多杀性巴氏杆菌病（A型）、兔支气管败血波氏杆菌病的发生。