本发明公开了一种针对金黄色葡萄球菌的快速恒温检测方法、引物组及应用。所述方法为：从待测样品中提取基因组DNA；以所述基因组DNA为模板，以能扩增金黄色葡萄球菌特异性序列的引物组为引物，在酶反应体系下进行恒温扩增反应；通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在金黄色葡萄球菌。本发明检测方法具有高灵敏度和高特异性，检测时间短，结果判定简单，操作便捷，成本低，具广泛应用前景。