本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种酶解玉米浆、其制备方法及在枯草芽孢杆菌发酵中的应用。本发明提供的酶解方法包括两步酶解，第一步中的复合酶Ⅰ包括漆酶、α‑葡萄糖苷酶和果胶酶；第二步中的复合酶Ⅱ包括植酸酶、酸性蛋白酶和酸性纤维素酶。该酶解方法能够有效降低玉米浆的抗氧化活性，酶解后的玉米浆能够代替豆粕作为氮源用于枯草芽孢杆菌发酵，降低了发酵原料成本；在枯草芽孢杆菌发酵液喷干时，能降低干燥时蒸汽的使用量并减少干燥时间。