本发明公开了一种金霉素发酵培养基分消及应用方法，所述方法包括如下步骤：将培养基中玉米浆和除pH缓冲剂外的无机组分配制成A液，将除玉米浆外的其余有机组分、pH缓冲剂和消泡剂配制成B液，将A液和B液分别进行灭菌，灭菌完毕后冷却，根据发酵培养基所需体积将冷却后的A液打入至少一批次的B液中，接种后进行发酵生产。该方法可一次性将多批次A液进行灭菌，灭菌后的A液可同时与多批次B液混合用于发酵。该方法可以最大限度的降低高温杀菌过程中培养基营养成分的破坏，提高原料的利用率和发酵效价，并且该灭菌方法无需专用灭菌设备，所有灭菌过程即可在发酵罐内完成，操作简单，染菌几率小，灭菌效果稳定可靠。