本发明提供了一种甜菊糖苷的制备纯化方法及其在抗疲劳产品中的应用，涉及提取技术领域，该制备纯化方法具体包括以下步骤：（1）提取：将甜菊叶与提取剂混合后进行回流提取，得到提取液A；（2）絮凝沉淀：向提取液A中加入絮凝剂，过滤，去除沉淀，得到滤液；（3）二次提取、精制、浓缩：使用吸附柱对滤液进行二次提取，过精制柱，浓缩即得；其中，絮凝剂包括：聚合硫酸铁、活性炭、硫酸亚铁、柠檬酸铁、甘氨酸铁、海菜粉、淀粉和沸石粉。通过絮凝剂组分以及整体方法的优化，能够有效提高除杂率以及提取率，降低损失率，通过上述方法获得的甜菊糖苷为原料制备出的产品具有优异的抗疲劳效果。