本发明涉涉及医用生物材料技术领域，特别涉及一种培养基、其制备的角膜基质片和制备方法。本发明提供的培养基为含有猪角膜提取物、Y‑27632、ITS、FGF、抗坏血酸和胎牛血清的DMEM/F12培养基。本发明通过选择适宜的活性组分及配比，使得采用该培养基制得的角膜基质细胞和角膜基质片与传统培养基制得的角膜基质细胞和角膜基质片相比，具有维持角膜基质细胞表型、促进增殖、提高活力，抗纤维化和抗凋亡等功能。本发明所述角膜基质片以角膜透镜为原料，采用所述培养基培养制备得到，相比动物来源的角膜修复材料，具有良好的生物相容性、无抗原性，可用于角膜移植各种供体材料的替代物，能被广大患者接受并长期应用于临床。