一种在大肠杆菌表达系统中高效表达外源蛋白的方法及其应用

授权公布号：CN113265365B

有效

申请

2020-02-17

申请公布

2021-08-17

授权

2023-10-17

预估到期

2040-02-17

申请号	CN202010096475.0
申请日	2020-02-17
申请公布号	CN113265365A
申请公布日	2021-08-17
授权公布号	CN113265365B
授权公告日	2023-10-17
分类号	C12N1/21;C12N15/70;A61K39/12;A61K39/245;A61K39/235;A61K39/23;A61K39/39;A61K39/00;A61K45/06;A61P33/12;A61P31/14;A61P31/20;C12R1/19N
分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
申请人名称	普莱柯生物工程股份有限公司
申请人地址	河南省洛阳市高新区凌波路5号

专利法律状态

2023-10-17 授权

状态信息

授权

2021-09-03 实质审查的生效

状态信息

实质审查的生效；IPC(主分类):C12N1/21；申请日:20200217

2021-08-17 公布

状态信息

公布

摘要

本发明涉及一种高效表达外源蛋白的大肠杆菌构建方法及其应用，其中，所述方法包括：步骤（1）BL21（DE3）lpxM基因的敲除；步骤（2）将tig基因插入步骤（1）得到的BL21（DE3）lpxM基因缺失株；（3）重组载体pET28a‑Rcodon的构建；（4）外源蛋白基因克隆至步骤（3）得到的重组载体pET28a‑Rcodon；（5）将步骤（4）所得重组载体转化步骤（2）得到的菌株；以及步骤（6）外源蛋白的收获。本发明方法使得外源蛋白高效表达，能较大肠杆菌常规表达显著提高外源蛋白的表达量，内毒素含量大大降低，且本发明方法可应用到多种外源蛋白的高效表达，可广泛适用于真核生物来源的蛋白在内的多种兽医疫苗蛋白，具有广泛的适用范围。