本发明公开了一种I群血清4型‑血清8型禽腺病毒二价亚单位疫苗及其制备方法，其包含具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的4型禽腺病毒纤维蛋白和具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的8型禽腺病毒纤维蛋白。本发明采用禽腺病毒血清4型和血清8型全长的纤维蛋白为免疫原制备二价亚单位疫苗，经特定的密码子优化方式优化后，血清4型和血清8型的纤维蛋白的表达量和可溶性表达量显著提高。本发明提供的二价亚单位疫苗的具有较高的安全性，能够快速诱导免疫动物产生高水平的中和抗体，实现禽腺病毒血清4型和血清8型的高效免疫保护，且疫苗的制备过程简单，成本低，易于大规模生产。