本发明属于中药制剂的质量检测技术领域，具体提供了小柴胡复方制剂指纹图谱及其构建方法和小柴胡复方制剂的含量测定方法，其中，小柴胡复方制剂指纹图谱的构建方法包括以下步骤，（1）小柴胡复方制剂供试品溶液的制备；（2）取小柴胡复方制剂供试品溶液采用高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲酸的水溶液‑乙腈为流动相梯度洗脱，并通过反复试验得到洗脱程序，在本发明的洗脱条件下，不仅显著增加了共有峰个数，而且明显提高了共有特征峰的分离度，大大缩短检测时间，而且各共有峰峰形良好且无干扰，从而能够更加全面、清楚、有效的对小柴胡复方制剂进行质量检测。