本发明公开了一种艾司奥美拉唑钠药物中对映异构体的检测方法，所述检测方法包括：采用反相高效液相色谱法，以表面有纤维素‑三（3,5‑二甲基苯基氨基甲酸酯）共价键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器；流动相为碳酸氢铵水溶液、水溶性非质子有机溶剂以及低级烷醇所形成的混合体系；以所述流动相进行洗脱，检测艾司奥美拉唑钠药物中的对映异构体含量。相比于现有技术，本发明的检测方法具有更高的专属性，有效地避免了稳定性放样过程中主要降解杂质（加速和长期稳定性过程中产生）及可能存在的工艺杂质和中间体对于对映异构体检测的干扰；更能适用于注射用艾司奥美拉唑钠，具有更优越的精密度、准确度和耐用性。