本申请涉及一种水溶性阳离子聚脒的制备方法，其包括：S1、在有机溶剂中，二硝基乙烯基苯和N,N‑二溴氨基甲酸酯、以及双仲胺反应制备得到叔丁氧羰基取代的聚脒，反应温度为40℃‑80℃，反应时间为6h‑72h；二硝基乙烯基苯和N,N‑二溴氨基甲酸酯和双仲胺的摩尔比为1：2：0.5‑2，二硝基乙烯基苯的浓度0.01‑10mol/L；S2、脱除叔丁氧羰基，得到水溶性阳离子聚脒。使用二硝基乙烯基苯和N,N‑二溴氨基甲酸酯、以及双仲胺作为原料，反应制备得到水溶性阳离子聚脒，该制备方法操作简单，反应条件温和、环境友好、无需金属催化剂，制备得到的水溶性阳离子聚脒具有水溶性，提高了生物相容性，且可有效包载基因。