一种血清中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，属于试剂盒技术领域。本发明的试剂盒，包含R1试剂和R2试剂；R1试剂为含有保护剂和防腐剂的缓冲液；缓冲液为3‑[（1，1‑二甲基‑2‑羟乙基）氨基]‑2‑羟基丙磺酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液或者三羟基氨基甲烷‑盐酸缓冲液；保护剂为双甘肽；防腐剂为Proclin300；R2试剂为含有表面活性剂、防腐剂和底物的缓冲液；缓冲液为酒石酸缓冲液；表面活性剂为烷基酚的聚氧乙烯醚和脂肪醇聚氧乙烯醚中的一种或两种；防腐剂为Proclin300；底物为甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺。该试剂盒，试剂开封稳定性和高温稳定性高，重复性好；避免了临床测试的假性结果，检测效率和准确度高。