本发明公开了蚕蛹蛋白多肽的分离纯化方法，该分离纯化方法的具体步骤为：将蚕蛹蛋白酶解产物溶于双蒸水中，离心后上清液即为蚕蛹蛋白多肽粗液；将蚕蛹蛋白肽液溶于双蒸水，离心后上清液加入到离子交换树脂层析柱，洗脱，收集对ACE抑制活性最好的蛋白多肽，即为离子交换层析酶解物；将离子交换层析酶解物溶于双蒸水，离心后上清液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，用双蒸水进行洗脱，根据280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分；将上述凝胶层析酶解物溶于双蒸水，利用高效液相色谱进行纯化，即得蚕蛹蛋白多肽。有益效果为：本发明分离方法简单，可快速高效地分离出蛋白多肽，蛋白多肽得率高、损失低、纯度高、活性不被破坏，得到的蛋白多肽对ACE抑制活性好。