本实用新型公开了一种平皿培养基接种辅助装置，包括圆形托盘，圆形托盘的下端设置有支架，圆形托盘的上端设置有辅助平皿定位的定位机构，圆形托盘的中心处设置有定位孔。本实用新型结构简单新颖，设计巧妙合理，体积小巧，不占空间，可长期放置在洁净工作台内，持续重复利用，可辅助接种人员快速、准确地确定平皿的中心处，确保每块平皿种菌丝生长的均匀和均一性；本实用新型的每个定位组件中的定位板的位置可自由调节，以满足各种规格平皿的使用要求，适用范围广，实用性强，适宜推广。