本发明涉及药物化学领域的一种莱柯霉素晶型Ⅰ及其制备方法和应用。所述莱柯霉素晶型Ⅰ，使用Cu‑Ka辐射，粉末的X射线衍射图谱在衍射角2θ为5.366±0.2°、7.794±0.2°、8.189±0.2°、10.285±0.2°、10.716±0.2°、15.432±0.2°、16.655±0.2°处有特征峰。所述莱柯霉素晶型Ⅰ的制备方法，包括以下步骤：S1，在莱柯霉素中加入丙酮后，搅拌、抽滤，获得第一滤饼；S2，在第一滤饼中加入乙醚和丙酮后，加热、冷却、抽滤，获得第二滤饼；S3，对第二滤饼进行洗涤、干燥，获得莱柯霉素晶型Ⅰ。本发明所述莱柯霉素晶型Ⅰ的稳定性好，纯度和含量高，具有很好的应用前景。