本发明提供了一种同时测定3种磺胺类和4种喹诺酮类抗生素含量的高效液相色谱分析方法，属于分析技术领域。本发明方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.3％醋酸钠溶液‑乙腈为流动相进行洗脱，在50min内可实现3种磺胺类和4中喹诺酮类抗生素的完好分离与定量分析，且方法专属性强、精密度高、稳定性好、准确度高，操作简便，试剂与耗材价廉易得，适用于医药与食品行业中对产品中多种抗生素的质量控制与分析，可有效地节约检测成本与时间。