本发明公开了一种同时测定14种维生素含量的高效液相色谱分析方法，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1M醋酸钠溶液‑甲醇为流动相进行梯度洗脱，联合流动相的梯度流速和紫外检测器的程序变化波长，在60分钟内可实现14种维生素（包括4种脂溶性维生素和10种水溶性维生素）的完好分离与定量分析，方法专属性强、精密度高、稳定性好、准确度高，操作简便，试剂与耗材价廉易得，适用于医药与食品行业中复合维生素产品的质量控制，可有效地节约检测成本与时间。