本发明公开了一种华佗救心丸中蟾酥的含量测定方法，包括确定色谱条件，对照品溶液的制备，供试品溶液的制备和测定法等步骤。该方法具有简便快捷，耗时短，耗材低，并且具有精密度和重现性好、稳定性佳的优点，能够有效的检测出华佗救心丸中蟾酥的含量，可用于华佗救心丸质量的定量评价，且其能在同一色谱条件下同时检测蟾酥中八种成分，这不仅能有效鉴别华佗救心丸中微量成份蟾酥的有无，也能及时对蟾酥的含量进行准确检测，使得对华佗救心丸的质量控制更加全面、有效，为华佗救心丸的质量控制提供重要保障。