本发明公开了一种用于皮肤组织解离的混合酶，由胶原酶II、胰蛋白酶和脱氧核糖核酸酶I组成；所述胶原酶II的浓度为2‑4mg/mL；所述胰蛋白酶的浓度为1‑3mg/mL；所述脱氧核糖核酸酶I的浓度为0.01‑0.05mg/mL。此外，本发明还公开了用于皮肤组织的解离方法，将皮肤组织通过特定的缓冲液前处理，并采用上述特定的混合酶，进行组织解离，可高效、快速、稳定地获得单细胞总数多、活性好、碎片少、成团率低的皮肤组织单细胞悬液，本发明筛选优化的混合酶及浓度更具有针对性和高效性，相比广谱好几种胶原酶结合使用的方法更节约成本和时间，本发明为一直很难解离的皮肤组织样本的单细胞相关研究提供了良好的工具。