一种基于CRISPR-Cas9技术的miR-126全长基因敲除试剂盒及其应用

授权公布号：CN106566838B

有效

申请

2016-11-14

申请公布

2017-04-19

授权

2019-11-01

预估到期

2036-11-14

申请号	CN201611002317.4
申请日	2016-11-14
申请公布号	CN106566838A
申请公布日	2017-04-19
授权公布号	CN106566838B
授权公告日	2019-11-01
分类号	C12N15/63;C12N15/113
分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
申请人名称	上海伯豪生物技术有限公司
申请人地址	上海市浦东新区张江高科技园区李冰路151号

专利法律状态

2019-11-01 授权

状态信息

授权

2017-05-17 实质审查的生效

状态信息

实质审查的生效IPC(主分类):C12N 15/63申请日:20161114

2017-04-19 公布

状态信息

公开

摘要

本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9技术的miR‑126全长基因敲除试剂盒及其应用。本发明优选miR‑126基因上下游CRISPR‑Cas9靶标序列，设计合成针对该靶标序列的sgRNA单链，并构建到载体中，通过转染293T细胞株，sgRNA与trRNA构成特异识别结构，从而引导Cas9酶特异剪切miR‑126基因两端对应序列，持续药筛得到miR‑126全长基因敲除细胞株；经对药筛细胞株测序验证，得到优选的上下游sgRNA组合，该组合的敲除效率高达90％以上，以此构建试剂盒，可对293T、肺癌细胞系A549以及血管内皮细胞HUVEC系等多种类型细胞系进行特异性的miR‑126全长基因敲除。