本发明公开了一种测定幽门螺杆菌抗体的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用。该试剂盒的组成包括：稀释液、幽门螺杆菌抗原的胶乳试剂和空白液，还可包括校准品和质控品。所述的幽门螺杆菌抗原为幽门螺杆菌抗原，可为幽门螺杆菌全菌体蛋白抗原、幽门螺杆菌尿素酶抗原、幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗原或幽门螺杆菌细胞空泡毒素A抗原中的一种或多种，所述胶乳试剂为已吸附幽门螺杆菌抗原的两种不同粒径胶乳颗粒的混合物，制备所述校准品、质控品所需的幽门螺杆菌抗体源自感染幽门螺杆菌患者血清中IgM和/或IgG。本发明适用于各类型全自动生化分析仪和半自动生化分析仪，具有检测快速、敏感度高、特异性强和准确性好等优点。