一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，本发明涉及一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法。本发明的目的是为了解决现在使用生理盐水进行复苏冷冻的脐带血造血干细胞的前期处理，细胞很容易聚团、细胞碎片增多、活率降低以及细胞数量减少的问题，方法为：一、配置缓冲液；二、去除纤维蛋白的血浆；三、向缓冲液中加入低分子肝素钠、羟乙基淀粉和聚乙二醇；最后加入去除纤维蛋白的血浆，即完成。本发明保护剂能够有效保护细胞的活率，细胞不容易聚团，细胞集落形成较好，能够有效保护复苏后造血干细胞细胞的活性，细胞数量，细胞不聚团，保证集落的形成力；本发明应用于造血干细胞复苏后保护剂的配制领域。