一种提高间充质干细胞适应高糖环境的驯化方法及其应用，涉及一种干细胞驯化方法及其应用。是要解决现有干细胞治疗糖尿病中，干细胞对体内高糖环境不适应而存活时间短、起效作用弱的问题。方法：一、将脐带组织消毒，清洗，然后剪成组织段，将组织段清洗，去除血管及表皮获得华通氏胶，剪碎，于培养基中培养，得到P0代细胞；二、将P0代细胞进行传代获得P1代细胞，传代培养基为含sPL的L‑DMEM培养基；三、将P1代传至P5代，逐代提高葡萄糖浓度进行细胞适应性驯化。本方法获得耐糖细胞系，同时结合sPL多因子，有助于干细胞增殖及特性维持，从而保证干细胞移植后的长期存活及缓解胰岛素抵抗效果。本发明用于间充质干细胞的驯化。