本发明涉及干细胞技术领域，具体的更涉及一种细胞存活率高的人脐带间充质干细胞的冻存方法。一种细胞存活率高的人脐带间充质干细胞的冻存方法，步骤包括：（1）消化和终止消化：将不超过5代的人脐带间充质干细胞酶解消化1～5min，再加入终止液终止消化；（2）洗涤离心：离心弃去上清，加洗涤剂重复洗涤、离心操作2～3次；（3）程序冻存：以1×107/ml细胞密度加入预冷的冻存液，重悬后，吸取1～5m细胞悬液至程序降温仪中进行程序降温冻存。本发明通过在特殊的冻存液的存在下配合适合的冻存步骤后，使细胞冻存前后细胞存活率并未明显降低、存活率在97％以上，除此之外细胞数量仍然保持较高的浓度。