一种用于免疫诊断试剂配制的肌钙蛋白I抗体的制备方法及获得的菌株，制备步骤包括：（1）设计cTnI蛋白‑NH2端41～56aa和80～95aa序列短肽作为免疫半抗原；（2）肽段与载体蛋白偶联；（3）免疫小鼠；（4）细胞融合；（5）腹水制备及单抗纯化，从小鼠体内抽取腹水后再通过粗纯和精纯化方法步骤，即获得纯度大于95％的单克隆抗体。本发明以目标肽段作为免疫原、主动避开各种干扰因素的影响，提高cTnI抗体所配制测定试剂的检测准确度，从而更高效地制备出用于配制检测特异性优良的cTnI测定试剂所需的抗体原料。