本发明公开一种小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括聚氧乙烯脂肪酸酯、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、十二烷基多肽和曲拉通X‑100；血清样本中的小而密低密度脂蛋白胆固醇在聚氧乙烯脂肪酸酯的作用下受到保护，其与胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的反应在一定程度上被抑制，而其它脂蛋白胆固醇则在十二烷基多肽的作用下与胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶反应而被消除；曲拉通X‑100与剩余的小而密低密度脂蛋白胆固醇反应检测出其含量。本发明能够用于快速方便地检测血清样本中的sdLDL‑C。本发明所述的试剂配方简单易制，成本低，能够大规模地产业化配制，同时本发明的试剂盒能够高效、准确、特异性地检测样本中的小而密低密度脂蛋白胆固醇。