本发明首先以E13杂交瘤细胞株为原料提取总mRNA，以此为模板反转录得到cDNA，选用IgG保守区序列特异性引物扩增单抗的轻链可变区和重链可变区基因，将扩增得到的轻、重链可变区基因序列在IMGT数据库进行生物信息学分析，得到序列准确可靠的候选轻链和重链可变区基因，通过本发明的制备方法获得cTnI E13单克隆细胞株的轻重链可变区基因序列，实现以基因序列形式对E13单抗细胞株实现永久保种；并提供一种原核表达E13单链抗体的制备方法，为后续建立过程简易，成本低廉的诊断抗体原料制备工艺提供基础。