本实用新型公开了一种工厂化食用菌无污染净化接种室，包括接种室本体、第一门体、第二门体以及缓冲室，所述接种室本体内部设有缓冲室，所述缓冲室固定连接在接种室本体的内侧，所述缓冲室的外部设有第一门体和第二门体。该一种工厂化食用菌无污染净化接种室，通过在接种室本体的内部增设缓冲室，较好的解决了传统食用菌接种室存在污染的问题，由于在缓冲室的内外两侧安装第一门体和第二门体，工作人员在进入到接种室时首先就会进行第一次消毒，然后进入到缓冲室的内部，由缓冲室内的消毒装置进行第二次消毒，接着才能够进入到接种室的内部对食用菌进行接种操作，大大降低了接种过程中的细菌含量，整体结构简单，使用时较为的方便，实用性较强。