本发明涉及兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种赤羽病毒阳性血清及其制备方法。该血清采用赤羽病毒AKAV/JL/2022病毒液以及ISA 201VG佐剂制备的疫苗通过免疫动物制得。本发明制备了高中和效价的赤羽病毒特异性阳性血清，解决了目前市场上无牛赤羽病毒阳性血清的现状，可用于赤羽病毒疫苗的特异性检验、鉴别检验、外源病毒检验以及诊断检测等用途，满足牛赤羽病毒病诊断技术和疫苗质量控制的要求，为牛赤羽病毒高效价阳性血清的制备提供新思路。